2024 Autor: Elizabeth Oswald | [email protected]. E modifikuara e fundit: 2024-01-13 00:12
Pasi qelizat shfaqen të shkëputura, shtoni 2 vëllime të medias së rritjes së plotë të parangrohur për të çaktivizuar tripsinën. Shpërndani butësisht mediumin duke vendosur me pipetë mbi sipërfaqen e shtresës qelizore disa herë për të siguruar rikuperimin e >95% të qelizave.
Si mund ta ndaloj aktivitetin e tripsinës?
Tretja e tripsinës mund të ndalet me ngrirje ose duke ulur pH-në e reaksionit nën pH 4 duke shtuar acid formik, acetik ose trifluoroacetik (tripsina do të rifitojë aktivitetin kur pH është ngritur mbi pH 4). Mostrat e tretura mund të ruhen në -20°C.
Çfarë e neutralizon tripsinën?
Një tampon që përmban jone kalciumi dhe magnezi do të ngadalësojë gjithashtu aktivitetin e tripsinës. FBS është megjithatë mënyra më efektive për të frenuar aktivitetin e tripsinës.
A e çaktivizon serumi tripsinën?
Serumi çaktivizon tripsinën e mbetur nga tretja enzimatike e veshkave dhe enzimat proteolitike të sintetizuara më pas nga qelizat. Qelizat e sapotripsinizuara mund të rriteshin në monoshtresa në mungesë të serumit me kusht që ato të laheshin në mënyrë të përsëritur për të hequr tripsinën e mbetur.
Sa media duhet për të çaktivizuar tripsinën?
Përderisa përdorni të paktën raportin 1:1 të mediumit 5-10% që përmban serum me tripsinën tuaj, duhet të ketë më shumë se frenim të mjaftueshëm, i ndjekur nga centrifugimi dhe shkëmbim mesatar me medium të freskët.
Recommended:
Si të çaktivizojmë pepsinën në fyt?
Uji alkalik mund të neutralizojëaciditetin e pepsinës në fyt dhe proteinat me bazë bimore priren të prodhojnë më pak pepsinë. Kjo për shkak se proteinat bimore treten më së shumti në zorrët, ndërsa proteinat shtazore treten në stomak – që është edhe pika e prodhimit të pepsinës.
