Pasi qelizat shfaqen të shkëputura, shtoni 2 vëllime të medias së rritjes së plotë të parangrohur për të çaktivizuar tripsinën. Shpërndani butësisht mediumin duke vendosur me pipetë mbi sipërfaqen e shtresës qelizore disa herë për të siguruar rikuperimin e >95% të qelizave.
Si mund ta ndaloj aktivitetin e tripsinës?
Tretja e tripsinës mund të ndalet me ngrirje ose duke ulur pH-në e reaksionit nën pH 4 duke shtuar acid formik, acetik ose trifluoroacetik (tripsina do të rifitojë aktivitetin kur pH është ngritur mbi pH 4). Mostrat e tretura mund të ruhen në -20°C.
Çfarë e neutralizon tripsinën?
Një tampon që përmban jone kalciumi dhe magnezi do të ngadalësojë gjithashtu aktivitetin e tripsinës. FBS është megjithatë mënyra më efektive për të frenuar aktivitetin e tripsinës.
A e çaktivizon serumi tripsinën?
Serumi çaktivizon tripsinën e mbetur nga tretja enzimatike e veshkave dhe enzimat proteolitike të sintetizuara më pas nga qelizat. Qelizat e sapotripsinizuara mund të rriteshin në monoshtresa në mungesë të serumit me kusht që ato të laheshin në mënyrë të përsëritur për të hequr tripsinën e mbetur.
Sa media duhet për të çaktivizuar tripsinën?
Përderisa përdorni të paktën raportin 1:1 të mediumit 5-10% që përmban serum me tripsinën tuaj, duhet të ketë më shumë se frenim të mjaftueshëm, i ndjekur nga centrifugimi dhe shkëmbim mesatar me medium të freskët.
