Së pari, të dy EcoR1 dhe Xba1 lënë mbingarkesa 5' kur tresin ADN-në (siç bën Nde1). Në të dyja rastet, fundi 3' është i zhytur, prandaj poliermaza mund të shtojë baza. Së dyti, të gjitha polimerazat mund të shtojnë baza vetëm në një skaj 3', kështu që Klenow do të shtojë 4 baza në skajin 3' të tërhequr të të dy vendeve për të gjeneruar skajet e hapura.
A lënë enzimat kufizuese një fosfat 5?
Vektorët dhe insertet e tretur nga enzimat kufizuese përmbajnë modifikimet e nevojshme terminale (5'fosfat dhe 3'hidroksil), ndërsa fragmentet e krijuara nga Reaksioni Zinxhiri i Polimerazës (PCR) mund të jo.
A mund të lidhen skajet e hapura?
Lidhja me fund të hapur
Lidhja e skajit të hapur nuk përfshin çiftimin e bazës së skajeve të spikatura, kështu që çdo skaj i hapur mund të lidhet me një skaj tjetër të hapur. Fundet e hapura mund të krijohen nga enzimat kufizuese si SmaI dhe EcoRV.
A prodhon polimeraza Taq skajet e hapura?
Po… Taq Polimeraza shton A-Overhangs nëse e mbani hapin përfundimtar të zgjatjes në 72 dC në PCR. Përdoret kryesisht për Klonimin TA.
Pse të përdorim fragmentin Klenow në renditjen e ADN-së?
Fragmenti Klenow është jashtëzakonisht i dobishëm për detyra të bazuara në kërkime si: Sinteza e ADN-së me dy zinxhirë nga shabllonet me një zinxhir . Mbushja e skajeve 3' të tërhequra të fragmenteve të ADN-së për të bërë të hapur 5' mbingarkesë . Trerja larg mbivarjeve të zgjatura 3'.
