Trypsinizimi është procesi i disociimit të qelizave duke përdorur tripsinën, një enzimë proteolitike që zbërthen proteinat, për të shkëputur qelizat ngjitëse nga ena në të cilën ato kultivohen. Kur shtohet në një kulturë qelizore, tripsina zbërthen proteinat të cilat u mundësojnë qelizave të ngjiten në enë.
Pse i tripsinizojmë qelizat?
Tripsinizimi shpesh bëhet për të lejuar kalimin e qelizave në një enë të re, vëzhgim për eksperimentim ose reduktim të shkallës së konfluencës në balonë duke hequr një përqindje të qelizat.
Si funksionon tripsina për të shkëputur qelizat?
Trypsina/EDTA është një metodë e kombinuar për shkëputjen e qelizave. Tripsina shkurton proteinat ngjitëse në ndërveprimet qelizë-qelizë dhe qelizë-matricë duke prerë aminoacidin e proteinave ngjitëse në mënyrë specifike në lizinën ose agininën në terminalin C nëse aminoacidi në rrjedhën e sipërmenuk është prolinë.
Si i merrni qelizat ngjitëse të tripsinizuara?
Procedura
- Nxirreni mjedisin nga ena e kulturës me aspirim dhe lani shtresën e vetme me një tretësirë kripe pa Ca2+ dhe Mg 2+ për të hequr të gjitha gjurmët e serumit. …
- Shpërndani një sasi të mjaftueshme të tripsinës ose tretësirës së tripsinës/EDTA në enë(et) e kulturës për të mbuluar plotësisht monoshtresën e qelizave dhe vendoseni në inkubator 37 °C për ~2 minuta.
Si mund ta çaktivizoj tripsinën në kulturën qelizore?
Pasi qelizat shfaqen të shkëputura, shtoni 2 vëllimee mediave të rritjes së plotë të parangrohur për të çaktivizuar tripsinë. Shpërndani butësisht mediumin duke vendosur disa herë me pipe mbi sipërfaqen e shtresës së qelizës për të siguruar rikuperimin e >95% të qelizave. Për kulturat pa serum, frenuesi i tripsinës së sojës (Produkti Nr.
